Omegawave FLO-C1激光多普勒血流仪探究豚鼠下唇副交感舒血管纤维是否存在

《Journal of Comparative Physiology B》的一项研究中，来自北海道医疗大学口腔生物学系生理学分部的H. Ishii团队发表了题为《Occurrence of parasympathetic vasodilator fibers in the lower lip of the guinea-pig》的研究。该研究聚焦于豚鼠下唇副交感舒血管纤维的存在与否及其起源问题，通过电刺激舌神经、药物干预及逆行神经追踪等方法，系统验证了该纤维的存在性并探究其起源部位。

摘要

本研究旨在探究豚鼠下唇是否存在副交感舒血管纤维。电刺激豚鼠舌神经的中枢切断端，可引发下唇血流量和全身动脉血压（SABP）呈强度和频率依赖性下降。实验前24小时皮下注射节后交感神经阻滞剂兼抗高血压药物胍乙啶（30mg/kg），可降低全身动脉血压的下降幅度，而舌神经刺激仅在刺激同侧引发下唇血流量呈强度和频率依赖性增加。在经胍乙啶预处理的豚鼠中，舌神经刺激引发的下唇血流量增加可被自主神经节胆碱能阻滞剂六甲铵以剂量依赖性方式抑制。当下唇注射逆行神经示踪剂荧光金（Fluoro-gold）后，在同侧耳神经节中观察到标记神经元。本研究表明，豚鼠下唇存在源自耳副交感神经节的副交感舒血管纤维，这与先前在大鼠、猫、兔和人类中报道的结果相似。

关键词：副交感舒血管纤维；副交感血管舒张；豚鼠；下唇血流量；三叉神经

实验材料与仪器

实验材料

1. 实验动物：雄性Hartley豚鼠

2. 药物：胍乙啶、六甲铵、10%乌拉坦、泮库溴铵、2%荧光金（Fluoro-gold，FG）、0.9%生理盐水、0.1M磷酸盐缓冲液、4%多聚甲醛、30%蔗糖溶液。

3. 试剂：用于组织固定和切片的相关试剂，包括明胶包被玻片等。

实验仪器

双极银电极、电刺激器、二氧化碳监测仪、呼吸机、加热垫、微量注射泵、冷冻切片机、荧光显微镜、Omegawave FLO-C1激光多普勒血流仪

实验过程

1.动物准备

2.舌神经电刺激

分离左侧舌神经并切断，使用双极银电极连接电刺激器，对舌神经中枢切断端进行单侧电刺激。

3.指标测量

1. 全身动脉血压（SABP）测量：股动脉插管，通过压力传感器记录SABP，借助心率计监测心率。

下唇血流量测量：使用Omegawave FLO-C1激光多普勒血流仪监测双侧下唇血流量，探头轻贴下唇且不施加压力，通过八通道图表记录仪以10mm/min速度连续记录，通过图表上的反应高度评估血流量变化，唇血管传导率=平均血流量变化/平均SABP。

Omegawave FLO-C1激光多普勒血流仪

胍乙啶预处理与未预处理豚鼠中，左侧舌神经刺激的强度及频率依赖性效应对双侧唇部血管传导性（a、c）和全身动脉血压（SABP）（b、d）的影响

4.药物处理

1. 胍乙啶预处理：实验前24小时给豚鼠皮下注射30mg/kg胍乙啶，以减弱交感神经系统对下唇血流量的影响。

2. 六甲铵干预：给经胍乙啶预处理的豚鼠静脉注射1mg/kg或10mg/kg六甲铵，30分钟后重复舌神经电刺激，计算给药后反应幅度与给药前对照反应的百分比。

5.轴浆运输研究

1. 荧光金注射：豚鼠腹腔注射麻醉后仰卧，用微量注射泵以1μL/min速度向下唇左侧注射10μL 2%荧光金溶液，注射深度1mm，注射后留针2分钟避免回流。

2. 组织处理：注射后4天，深度麻醉豚鼠，先灌注200ml 0.1M磷酸盐缓冲的0.9%生理盐水，再灌注500ml 4%多聚甲醛的0.1M磷酸盐缓冲液；取出耳神经节、翼腭神经节和三叉神经节，在4℃、含30%蔗糖的0.1M磷酸盐缓冲液中保存1天，随后用冷冻切片机切成40μm切片，贴于明胶包被玻片上。

3. 观察：通过荧光显微镜观察荧光金标记的神经元。

实验结论

1. 未预处理的豚鼠中，舌神经电刺激（电压>5V或频率>5Hz）可引发SABP明显下降，双侧下唇血流量呈强度和频率依赖性下降，且双侧血流量下降幅度无明显差异。

2. 经胍乙啶预处理后，舌神经电刺激对SABP无明显影响，但引发同侧下唇血流量呈强度和频率依赖性增加，对侧无明显变化，且血流量增加与SABP变化无关联。

3. 六甲铵可剂量依赖性抑制胍乙啶预处理后舌神经刺激引发的同侧下唇血流量增加（1mg/kg剂量时为对照的47.3±9.7%，10mg/kg剂量时为11.7±11.7%）。

4. 下唇注射荧光金后，在同侧三叉神经节（下颌支）和耳神经节中观察到球形或椭圆形标记神经元，翼腭神经节中未发现标记神经元。

5. 综上，豚鼠下唇存在源自耳副交感神经节的副交感舒血管纤维，与大鼠、猫、兔和人类的相关发现一致。

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