IJMS丨 VAPOSCAN经皮水分流失测量仪探究伏马菌素对小鼠银屑病模型的影响

2024年7月，麻布大学兽医药理学实验室Tomoki Fukuyama等研究人员在期刊《International Journal of Molecular Sciences》发表了一篇题为《Oral Exposure to Low Concentration of Fumonisin B2, but Not Fumonisin B1, Significantly Exacerbates the Pathophysiology of Imiquimod-Induced Psoriasis in Mice》的文章。其具体研究内容是：探究口服伏马菌素暴露是否会促进银屑病的发生发展，具体对比了口服低浓度伏马菌素B1（FB1）和伏马菌素B2（FB2）对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病病理生理学特征的影响。

摘要

本研究旨在明确口服伏马菌素暴露是否会促进银屑病的发生发展。对雌性BALB/c小鼠进行为期10天的伏马菌素B1（FB1，0.1 mg/kg）或伏马菌素B2（FB2，0.1 mg/kg）口服给药，并在第6天至第10天（共5天）通过局部涂抹5%咪喹莫特乳膏诱导银屑病症状。结果表明，口服FB2加重了银屑病症状，包括皮肤厚度增加、搔抓行为增多、经表皮水分流失（TEWL）升高、真皮内免疫细胞浸润以及促炎细胞因子产生增加；而暴露于FB1后未观察到上述变化。本研究结果证实，口服FB2会通过增加皮肤厚度和损害屏障功能，对银屑病的发病机制产生不利影响。

关键词：伏马菌素B1；伏马菌素B2；白细胞介素-17；白细胞介素-22；银屑病

实验材料与仪器

实验材料

1. 动物：6周龄雌性BALB/c小鼠

2. 化学品与试剂：5%咪喹莫特乳膏、FB1、FB2、蒸馏水、10%福尔马林溶液、石蜡、苏木精-伊红染液、小鼠Fc Block、单克隆抗体（抗小鼠CD3、抗小鼠CD4、抗小鼠CD11c、抗小鼠CD40，BD Biosciences）、4',6-二脒基-2-苯基吲哚）、Dynabeads小鼠T-Activator CD3/CD28、IL-17和IL-22酶联免疫吸附测定试剂盒

实验仪器

皮肤厚度测量仪、ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪、细胞计数系统、细胞分选仪、微孔板读数仪

实验过程

1.动物饲养：小鼠饲养于12小时光照周期环境中，温度控制在22±3℃，湿度为50±20%，自由采食饮水。

2.给药与模型诱导：每组6只小鼠，从第0天至第10天每天口服给予0.1 mg/kg体重的FB1或FB2（用蒸馏水稀释）；对照组仅给予咪喹莫特乳膏，不口服FB1或FB2。从第6天至第10天，连续5天向小鼠剃毛后的背部前段和耳尖局部涂抹5%咪喹莫特乳膏，建立银屑病模型。

3.指标检测：

搔抓行为监测：末次涂抹咪喹莫特乳膏后，通过视频记录60分钟内小鼠针对颈部和耳部的搔抓次数。

皮肤相关指标测量：末次涂抹后24小时，测量背部皮肤厚度，并使用ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪检测TEWL，评估皮肤屏障功能。

ASCH  VAPOSCAN经皮水分流失测量仪

伏马毒素 B1（FB1）和伏马毒素 B2（FB2）暴露对咪喹莫特（IMQ）诱导的小鼠银屑病模型的影响。

（A）咪喹莫特诱导的背部皮肤厚度变化（mA）

（B）耳廓皮肤组织学（比例尺 = 100 μm）

（C）60 分钟内记录的搔抓次数

（D）经表皮失水量（TEWL，单位：g/m²/h）

（E）背部皮肤外观

4.组织病理学评估：将耳尖和背部皮肤样本固定于10%福尔马林溶液中，石蜡包埋后切成5μm厚切片，进行苏木精-伊红染色，由盲态病理学家按0（正常）、1（轻度）、2（中度）、3（重度）分级标准，对毛囊炎、溃疡、水肿和细胞浸润进行半定量评估。

5.流式细胞术分析：采用既往描述方法制备耳后淋巴结单细胞悬液，经小鼠Fc Block处理后，加入单克隆抗体和4',6-二脒基-2-苯基吲哚染色，通过细胞分选仪分析免疫细胞群体。

6.细胞因子释放测定：将5×10⁵个/孔的淋巴结单细胞悬液与Dynabeads小鼠T-Activator CD3/CD28共孵育24小时，采用酶联免疫吸附测定试剂盒检测上清液中IL-17和IL-22的浓度，通过微孔板读数仪测量450 nm处的吸光度。

7.统计分析：使用Prism 10软件进行数据分析，采用Bartlett检验评估方差同质性，方差齐时进行单因素方差分析和Dunnett多重比较检验，方差不齐时采用Kruskal-Wallis方差分析和Dunnett秩和检验，以P<0.05和P<0.01为差异具有统计学意义。

实验结论

1. 口服FB2而非FB1，加重了咪喹莫特诱导的小鼠银屑病炎症反应，表现为背部皮肤厚度增加、耳尖真皮内炎症细胞浸润增多、搔抓行为增强、TEWL升高（皮肤屏障功能受损）。

2. FB2暴露增加了耳后淋巴结中辅助性T细胞（CD3⁺CD4⁺）的数量，并促进了T细胞依赖性IL-17和IL-22的产生，而FB1暴露无上述效应。

口服FB2通过增加皮肤厚度、损害皮肤屏障功能，以及促进局部淋巴结中IL-17和IL-22的产生，对银屑病的发病机制产生不利影响，而FB1无此作用。

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