国内外体外皮肤渗透试验标准对比：OECD 428与T/SHBA 002-2023质控要求

摘要：

2023年10月25日，上海市美丽健康产业协会发布了一份团体标准，叫《化妆品评价体外皮肤渗透试验方法》，编号是T/SHBA 002—2023，从2023年11月1日起开始实施；这份团标在术语部分，把“经表皮水分流失量"也就是TEWL定义成：水分从真皮和表皮较深的水合层，向皮肤表面扩散时的通量密度，通常用g/m²/h来表示，用来确定表皮渗透性屏障状态，也用来评价皮肤屏障功能；在“试验要素"里，团标又写明通过TEWL或TER等测试方法，皮肤完整程度可以被确认，测试值也需要被记录和报告。ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪适配该标准，采用封闭腔湿度变化量测试方法，不受实验室气流影响，实现高效、精准的化妆品离体皮肤完整性筛查。

国际上的同类要求

这份团标的规范性引用文件，给出的逻辑也差不多；OECD 428《皮肤吸收：体外方法》（2004）、SCCS/1358/10《化妆品成分皮肤吸收体外评估基本准则》（2010）、GB/T 27818—2011《化学品 皮肤吸收 体外试验方法》，这些文件都要求，受试皮肤（膜）的完整程度要先被验证，试验才谈得上有效，这些要求虽然不一样，但指向同一个地方，就是进入扩散池之前，先要证明这道屏障是好的。

TEWL异常升高意味着什么

很多受试物想渗透进去，主要阻力来自角质层；取样、冷冻解冻、剪裁、装池，这些环节里只要有一个地方出现问题，受试物进入接收液的量就会虚假变高，透皮率会被高估，回收率和物料平衡也会跟着失真；这种误差还不会自己跑出来；TEWL反映的，正是屏障的透过性，数值越低，说明屏障越完整，异常升高，就说明屏障已经受损；测试人员用它逐片筛查，就等于在投入样品和检测资源之前，先给皮肤放行。

测试方法怎么选

要确认离体皮肤的完整程度，常见路线有三条；TEWL法属于非破坏性测量，轻轻一放就能读数，很快就能完成离体皮肤筛查；TER法也就是经皮电阻法，要把皮肤装进扩散池，还要加电极和接收液，读数会被液面高度、介质类型以及扩散池规格等影响；使用已知渗透特性的标准物质来测试，如氚水法，对于“先放行、后上样"这种流程来说，TEWL法的位置靠前，下面就按这个来展开。

离体皮肤完整性评价操作步骤

在温度20～22 ℃、相对湿度40%～60%的恒温恒湿间内开机。离体皮肤，如离体猪皮解冻后用生理盐水清洗，将皮肤装到扩散池中，探头开口插入到供给池中，按下按钮开始测量。仪器通过腔体内绝对湿度变化量自动计算出TEWL值。

结果读取：记录TEWL值（g/m²/hr），通常15g/m²/hr作为屏障完整性阈值，剔除异常个体并在报告中说明；数据与皮肤来源、部位、厚度、储存条件一并归档。

体外皮肤渗透试验研究案例

2024年11月来自复旦大学药学院的Su Tong研究团队在《Drug Delivery and Translational Research》期刊上发表了题为“Innovative freeze-drying technique in the fabrication of dissolving microneedle patch: Enhancing transdermal drug delivery efficiency"，使用BALB/c小鼠背部皮肤作为透皮介质来评价Rh123和INSFD-MNP的体外透皮递送速率。用眼科剪刀刮去小鼠皮肤的背部,并小心地移除皮下组织。然后用磷酸盐缓冲盐水(PBS, pH7.4)洗涤皮肤,并用滤纸吸收残留的水。随后,将处理过的皮肤固定到直径1厘米Franz扩散池上。小心移除皮肤下侧(真皮)和接收液之间的所有气泡,平衡30分钟后,利用ASCH AS-VT100RS经皮水分流失测量仪测量经表皮失水量(TEWL)。皮肤屏障完整的入选标准为TEWL测量值<15g/m²/hr。将微针压入小鼠皮肤并用胶带固定。将皮肤置于Franz扩散池的接收室和供应室之间,并加入2.2mL搅拌器和接收液。Rh123接收液为PBS缓冲液,INS接收液为0.01mol/L盐酸。实验在37°C下进行,在不同的时间点收集样品,每次收集后补充相同体积接收液。使用酶标仪测量样品的荧光强度,使用HPLC测定胰岛素含量。评价并比较了FD-MNP和常规MNP的载有药物的微针的体外透皮递送速率。

透皮曲线显示,与传统的MNP相比,FD-MNP在皮肤中的溶解和释放速度更快,使其能够更快地渗透皮肤,大大减少了药物的透皮延迟时间。对于胰岛素等需要快速起效的药物来说,FD-MNP的给药方法可能更好。

总结

从皮肤放行、上样到结果报告，TEWL测试出现在流程前端，却决定了后面透皮数据的可信度。把测量条件固定下来——同样的温湿度、同样的探头、同样的判定阈值——TEWL才能从一个读数变成一条可复核的依据。

参考资料

1.T/SHBA 002—2023《化妆品评价 体外皮肤渗透试验方法》，上海市美丽健康产业协会，2023-10-25 发布，2023-11-01 实施

2.OECD 428 Guideline for the testing of chemicals, skin absorption: in vitro method (2004)

3.SCCS/1358/10 Basic criteria for the in vitro assessment of dermal absorption of cosmetic ingredients (2010)

4.GB/T 27818—2011《化学品 皮肤吸收 体外试验方法》

5.Berardesca E, Loden M, Serup J, Masson P, Rodrigues LM. The revised EEMCO guidance for the in vivo measurement of water in the skin. Skin Res Technol, 2018, 24(3): 351-358.

6.Su T, Tang Z, Hu J, Zhu Y, Shen T. Innovative freeze-drying technique in the fabrication of dissolving microneedle patch: Enhancing transdermal drug delivery efficiency. Drug Deliv Transl Res. 2024 Nov;14(11):3112-3127. doi: 10.1007/s13346-024-01531-y.

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