经皮水分流失测量仪：副干乳杆菌与酵母菌混合培养物的免疫调节作用

2025年，Tomoki Fukuyama团队在《Biomedcines》期刊上发表了一项题为“Topical Administration of a Mixed Microbial Culture of Lactobacillus paracasei,Pichia membranifaciens and Saccharomyces cerevisiae Significantly Inhibits the Development of Atopic Dermatitis in a Mouse Model Through IL-10 over Expression by Dendritic Cells"的研究。该研究探讨了由副干酪乳杆菌、膜毕赤酵母和酿酒酵母组成的混合微生物培养物（LS）对特应性皮炎（AD）小鼠模型的影响，重点评估其免疫调节和抗炎作用。

摘要

背景：本研究聚焦于一种由副干酪乳杆菌、膜毕赤酵母和酿酒酵母组成的混合微生物培养物（LS）作为新型益生菌，探讨其在特应性皮炎（AD）小鼠模型中通过皮肤给药的疗效。

方法：使用小鼠树突状细胞系（DC2.4）检测LS的免疫调节作用，测定IL-10和TNFα的水平。在刺激状态下的人表皮角质形成细胞（HaCaT）中，评估LS对IL-8和TARC产生的抑制作用。最后，在通过局部致敏诱导的AD小鼠模型中，观察LS（10%）局部给药的干预效果。结果：LS显著促进DC2.4细胞分泌IL-10和TNFα，并显著抑制HaCaT细胞中IL-8和TARC的产生。在AD小鼠模型中，LS虽未显著改善临床症状，但降低了局部淋巴结中IgE阳性B细胞数量和IL-4水平。预防性使用LS可明显减轻AD症状。

结论：LS具有免疫调节和抗炎作用，可用于预防AD的发生。

材料与仪器

材料：副干酪乳杆菌、膜毕赤酵母、酿酒酵母混合培养物、细胞系、培养基、胎牛血清（FCS）、青霉素-链霉素、重组人TNFα、IFNγ、ELISA试剂盒、抗体

仪器：流式细胞仪、细胞计数仪、ASCH AS-VT100RS VAPO SCAN经皮水分流失测量仪

ASCH AS-VT100RS VAPO SCAN经皮水分流失测量仪

实验过程

1 细胞实验

使用小鼠树突状细胞系（DC2.4）和人表皮角质形成细胞系（HaCaT）进行体外实验。将DC2.4细胞与不同浓度（0-1 mg/mL）的LS混合微生物培养物共培养，检测IL-10和TNFα的分泌水平。将HaCaT细胞先用TNFα和IFNγ刺激1小时，再加入不同浓度的LS共培养24小时，检测IL-8和TARC的分泌水平。所有细胞因子浓度均使用ELISA试剂盒测定。

2 动物实验

使用NC/Nga小鼠建立特应性皮炎（AD）模型，通过涂抹屋尘螨提取物（Biostir AD）诱导皮炎。实验分为治疗性实验和预防性实验两部分：

治疗性实验：从AD诱导后第19天开始，每日在小鼠背部皮肤涂抹10% LS溶液（0.1 mL/只），对照组涂抹蒸馏水。每周评估AD临床评分、背部皮肤厚度和经皮水分流失量（TEWL）。

图1 在预防性实验中，与AD对照组相比，LS局部给药降低了（A）AD临床评分，但（B）皮肤厚度和（C）经皮水分流失量（TEWL）未见变化。（D）皮肤病变的代表性宏观图像和（E）受累皮肤的组织学切片（比例尺 = 100 μm）。LS给药减少了耳廓淋巴结中（F）CD3+CD4+CD44+CD62L−效应T细胞的数量，但对（G）CD19+IgE+ B细胞或（H）CD11c+树突状细胞无影响。细胞因子方面，（I）IL-4水平降低，而（J）IL-13和（K）IL-17水平未见变化。数据以平均值±标准误（SEM）表示。各组样本量：未处理组（n = 1），AD对照组（n = 6），LS处理组（n = 7）。** p < 0.01（Student's t检验）与AD对照组比较。AD，特应性皮炎；TEWL，经皮水分流失量。

预防性实验：在AD诱导前即开始每日涂抹10% LS溶液，后续监测指标同治疗性实验。

3 样本分析

实验结束后，收集小鼠耳廓淋巴结，制备单细胞悬液。使用流式细胞仪分析T细胞、B细胞和树突状细胞的亚群变化。将淋巴结细胞用CD3/CD28磁珠刺激24小时，收集上清液检测IFNγ、IL-4、IL-13和IL-17水平。同时取背部皮肤进行组织病理学检查，评估表皮增生、角化、结痂及炎症细胞浸润程度。

4 数据分析

体外实验使用方差分析（ANOVA）后接Dunnett检验，体内实验使用Student's t检验或双因素ANOVA后接Sidak检验。p < 0.05视为有统计学意义。数据以平均值±标准误（SEM）表示，使用GraphPad Prism 10软件分析。

实验结论

LS通过上调树突状细胞的IL-10表达，表现出免疫调节和抗炎作用。在AD小鼠模型中，预防性局部使用LS可抑制AD症状的发展，提示其在人类和伴侣动物中具有预防AD的潜力。

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