江苏知原药业通过IVRT与IVPT试验在地奈德乳膏和洗剂生物等效性BE研究

2025年10月3日江苏知原药业股份有限公司的Om Sambhaji Shelke研究团队在《Journal of Pharmaceutical Innovation》（IF=5.2）期刊发表了一项题为“IVRT and IVPT of Desonide Lotion and Cream: Correlation with Human Bioequivalence Study"研究。针对外用制剂传统临床终点生物等效性研究成本高、耗时长、流程复杂的问题，开发并验证了地奈德（Desonide）乳膏和洗剂的体外释放试验（IVRT）与体外渗透试验（IVPT）方法，结合皮肤发白试验，建立了外用制剂的生物等效性评估体系。

摘要

背景：外用生物等效性（BE）研究对于批准价格亲民且安全性和有效性与原研药相当的仿制药很重要。然而，外用制剂的传统临床终点研究成本高昂、耗时漫长且流程复杂。本研究探索了体外释放试验（IVRT）和体外渗透试验（IVPT）方法，并通过生物等效性研究进一步评估制剂。

方法：IVRT方法以pH 4.0醋酸缓冲液中的50%乙醇为受体介质，采用尼龙66合成膜开发并验证，该方法具有良好的线性、精密度、灵敏度和稳健性。IVPT方法以猪皮作为人体皮肤的替代模型，生理盐水为受体介质，旨在实现测试制剂与参比制剂的累积渗透率和渗透速率具有可比性。皮肤发白试验分别纳入18名和100名受试者。

结果：IVRT试验中，洗剂的测试制剂与参比制剂90%置信区间为97.78%107.1%，乳膏为93.5%112.8%（符合75%133.33%的接受标准）；乳膏和洗剂的测试制剂与参比制剂均在24小时达到渗透速率（Jmax），其T/R比分别为100.0%和110.0%（90%置信区间符合80%125%标准）；累积渗透率的T/R比分别为95.2%（乳膏）和104.5%（洗剂）。渗透试验后，乳膏测试制剂和参比制剂的平均回收率分别为97.4±7.7%和101.6±10.5%，洗剂分别为88.2±5.1%和86.8±3.9%。IVRT和IVPT结果均证实了生物等效性，皮肤发白试验进一步验证了测试制剂的生物等效性。

结论：研究结果表明，测试制剂与参比制剂具有相似的释放和渗透特性，支持其在人体中的生物等效性。这种整合方法凸显了IVRT和IVPT作为外用皮肤药物制剂开发和体外生物等效性评估的可靠工具的应用价值。

实验材料与仪器

材料

制剂：含0.05%地奈德的乳膏和洗剂。

试剂与化学品：所有用于IVRT和IVPT研究的试剂和化学品均为分析纯，购自当地供应商。

皮肤样本：1月龄巴马仔猪的腹部前侧皮肤。

仪器

透皮扩散系统、高效液相色谱仪、高效液相色谱-质谱联用仪、ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪、冷冻研磨机、分光光度计。

实验过程

IVRT方法开发与验证

• 受体介质选择：基于地奈德在不同介质中的溶解度和化学稳定性，筛选出pH 4.0醋酸缓冲液中的50%乙醇作为受体介质。

• 膜选择：通过药物回收率和杂质分析，确定尼龙66合成膜为适配膜。

• 采样时间设定：设定0.5h、1h、2h、3h、4h、6h为采样时间点，确保药物释放线性关系良好（R²≥0.97）。

• 方法验证：对线性范围、精密度、灵敏度、选择性、回收率、质量平衡和稳健性等参数进行验证，确认方法可靠。

IVPT方法实施

• 皮肤处理：仔猪腹部皮肤经脱毛、无菌分离后，-20℃冷冻储存（有效期2个月），使用前恢复至室温，切成直径约3cm的圆盘，厚度控制在500±250μm，经TEWL分析（数值<25g/m²/h）确认皮肤完整性。

• 样本设计：采用单剂量、两处理、平行、每处理多重复设计，将测试和参比制剂随机分配至A、B组。

• 试验条件：受体介质为脱气的pH 7.4磷酸盐生理盐水，温度维持在34℃，搅拌速度600rpm，确保皮肤温度稳定在32±1℃；采样时间点为0h、2h、4h、8h、12h、24h，采样后补充等量新鲜介质。

• 将皮肤固定于透皮扩散池并预先恒温至 32 ℃±1 ℃后，使用ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪在皮片上等距取点完成三次平行测定，记录经皮水分流失（TWEL）数值。经测定，CT 组、CR 组、LT 组和 LR 组的平均经皮水分流失结果（n=18）分别为 8.361±0.85、8.367±0.99、9.811±1.58 和 9.889±1.51，所有结果均符合本研究的预设标准。

ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪

• 药物提取与分析：试验结束后，刮取皮肤表面残留制剂，提取皮肤中渗透的药物，结合受体介质中的药物含量，进行质量平衡计算。

皮肤发白试验

• 初步研究：纳入18名健康中国受试者，确定参比制剂的半数有效剂量持续时间。

• 主要研究：采用随机、双盲、安慰剂对照、单剂量、交叉试验设计，纳入100名健康受试者，在受试者前臂涂抹不同剂量的测试和参比制剂，于给药后不同时间点通过分光光度计测量皮肤发白程度，评估药代动力学终点。

分析方法验证

• HPLC分析（IVRT样本）：以pH 4.0醋酸溶液-乙醇（50:50）为稀释剂，采用Zorbax Eclipse XDB-C8色谱柱，柱温20℃，检测波长245nm，流动相A（0.1%磷酸）与B（乙腈）比例58:42，流速1.0mL/min。

• LC-MS/MS分析（IVPT样本）：采用ACE Excel 2 C18-AR色谱柱，柱温40℃，流动相A（0.1%甲酸水溶液）与B（乙腈）梯度洗脱，流速0.3mL/min，电离模式为ESI+，MRM扫描模式。

实验结论

本研究开发并验证了地奈德乳膏和洗剂的IVRT和IVPT方法，两种方法均表现出良好的可靠性和稳健性。IVRT和IVPT结果显示，测试制剂与参比制剂的释放和渗透特性具有可比性，90%置信区间均在生物等效性接受范围内；皮肤发白试验进一步证实了两者在人体中的生物等效性。该研究确立的整合评估方法，不仅减少了外用制剂生物等效性研究对昂贵、耗时的临床研究的依赖，还为仿制药的安全性和有效性提供了有力保障，为外用类固醇制剂及其他外用皮肤药物的仿制药审批提供了高效、可靠的技术路径。

返回列表