IITCMRBP鼠尾血压测量仪阴虚型高血压大鼠肠道菌群与相关代谢产物研究

山东中医药大学杨传华团队在《辽宁中医杂志》2021年第48卷第4期发表研究，观察阴虚型自发性高血压大鼠肠道微生物组及相关代谢产物特征，探索阴虚型高血压生物标志物。

摘要

目的：观察阴虚型自发性高血压大鼠（SHR）肠道菌群及相关代谢产物特征，探讨阴虚高血压的生物标志物。

方法：将 7 只 18 月龄 SPF 级雄性 SHR、7 只 18 月龄 SPF 级雄性 WKY 大鼠、7 只 2 月龄 SPF 级雄性 SHR、7 只 2 月龄 SPF 级雄性 WKY 大鼠，分为 SHR 组、WKY 组、SHR.Y 组、WKY.Y 组。每周测定体质量与血压。对 SHR 组与 SHR.Y 组进行为期 4 周的超负荷游泳，诱导阴虚模型。采用 ELISA 法检测血清 NT-proBNP、NPY、CRP、Ang II、NE、cAMP、cGMP 水平。无菌条件下收集粪便标本，进行 16S V4 区扩增子测序与分析；采用气相色谱法检测粪便中短链脂肪酸（SCFAs）含量。

结果：衰老可升高 SHR 与 WKY 大鼠的收缩压、舒张压及脉压（P<0.05）。与 WKY 组相比，SHR 组 NT-proBNP、NPY、CRP、Ang II 水平均升高（均 P<0.05）。与 WKY.Y 组相比，WKY 组 NT-proBNP、NPY、NE、CRP 水平均升高（均 P<0.05）。衰老改变了 SHR 与 WKY 大鼠肠道菌群的 OTU 组成、α 多样性及 β 多样性。衰老可降低 SHR 大鼠乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸水平（P<0.05），并降低 WKY 大鼠乙酸、丙酸、丁酸水平（P<0.05）。

结论：衰老可升高 SHR 与 WKY 大鼠脉压、上调血清炎症水平、改变肠道菌群组成与多样性，并下调短链脂肪酸代谢水平。

实验材料与仪器

实验材料

1. 实验动物：18月龄雄性SPF级SHRs 7只、18月龄雄性SPF级WKY大鼠7只、2月龄雄性SPF级SHR大鼠7只、2月龄雄性SPF级WKY大鼠7只。

2. 检测试剂盒：大鼠血清NPY、NE、Ang Ⅱ、CRP、NT-proBNP、cAMP、cGMP ELISA试剂盒。

3. 饲料与试剂：Co60灭菌SPF级大小鼠维持饲料、超纯水、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、异己酸、磷酸、乙酸乙酯等，其他试剂均为国药分析纯。

实验仪器

IITC MRBP 10通道大小鼠尾血压测量仪，电子分析天平、梅特勒—托利多DELTA320型PH计、超纯水系统、冷冻离心机、实时荧光定量PCR仪、涡旋仪

IITC MRBP鼠尾血压测量仪

实验过程

1. 动物分组与模型制备：将大鼠分为SHR组、WKY组、SHR.Y组、WKY.Y组，适应性饲养1周；对SHR组与SHR.Y组大鼠进行4周超负荷游泳，6天/周，1次/d，持续2h或大鼠力竭下沉>2次终止，水温(30±2)℃，诱导阴虚模型。

2. 血压与体质量检测：适应性测压训练2周后，采用尾动脉加压法，尾部加温至32℃，每日下午固定时间使用IITC MRBP鼠尾血压测量仪测收缩压、舒张压、平均动脉压、脉压，重复3次取平均值；每周测量体质量。

3. 血清学指标检测：3%腹腔麻醉，下腔静脉取血，分离血清，按ELISA试剂盒说明书检测NT-proBNP、NPY、CRP、Ang Ⅱ、NE、cAMP、cGMP水平。

4. 肠道微生物组分析：无菌取大鼠粪便，-80℃保存；委托公司进行DNA提取、16S V4区扩增子测序，完成OTU聚类、物种注释、α多样性、β多样性及LEfSe分析。

5. 短链脂肪酸检测：采用GC-MS法，按设定色谱与质谱条件，检测粪便中乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸等SCFAs含量。

6. 统计学分析：用SPSS 19.0软件，数据以(x±s)表示，多组间比较用单因素方差分析，组间两两比较用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。实验结论

增龄使SHR大鼠及WKY大鼠收缩压、舒张压水平上升，脉压增加；上调血清NT-proBNP、NPY、CRP等炎症相关指标水平；改变肠道微生物OTU组成、α多样性及β多样性；下调乙酸、丙酸、丁酸等短链脂肪酸代谢水平。高血压状态下肠道菌群F/B比值升高，青年正常血压大鼠肠道菌群多样性好，增龄与高血压共同导致肠道菌群失衡及有益代谢产物减少。

参考文献

1. 参考文献1：Qin J, Li R, Raes J, et al. A human gut microbial gene catalogue established by metagenomic sequencing[J]. Nature, 2010, 464(7285):59-65. 

2. 参考文献2：Yang T, Santisteban MM, Rodriguez V, et al. Gut dysbiosis is linked to hypertension[J]. Hypertension, 2015, 65(6):1331-1340. 

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