外用副干酪乳杆菌培养物对特应性皮炎小鼠模型的干预研究

2025年10月，麻布大学兽医药理学实验室等在《Biomedicines》期刊上发表了一项研究。该研究以副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）、膜毕赤酵母和酿酒酵母的混合微生物培养物（LS）为新型益生菌，探讨了外用LS对特应性皮炎（AD）小鼠模型的治疗和预防效果，并通过体外实验研究了其免疫调节机制。

摘要

背景/目的

本研究聚焦于副干酪乳杆菌、膜毕赤酵母和酿酒酵母的混合微生物培养物（LS）这一新型益生菌，旨在探讨外用LS对特应性皮炎（AD）小鼠模型的治疗和预防效果。

方法

通过检测白细胞介素（IL）-10和肿瘤坏死因子（TNF）α水平，在小鼠树突状细胞系（DC2.4）中研究LS的免疫调节作用；通过关注IL-8和胸腺活化调节趋化因子（TARC）的产生，在受刺激的人表皮角质形成细胞（HaCaT）中评估LS的抗炎作用；最后，在通过局部致敏尘螨软膏建立的AD小鼠模型中，考察10% LS外用的治疗和预防效果。每周监测临床症状、背部皮肤厚度和经表皮水分流失（TEWL），尸检后分析耳后淋巴结的免疫反应。

结果

LS处理增强DC2.4细胞分泌IL-10和TNFα；与LS共培养后，受刺激的HaCaT细胞产生的IL-8和TARC减少。在AD小鼠模型的治疗设置中，虽然临床症状、皮肤厚度和TEWL无明显变化，但LS治疗组局部淋巴结中IgE阳性B细胞数量和IL-4水平降低；与AD对照组小鼠相比，LS预防治疗减轻了AD症状。

结论

研究结果表明，LS的免疫调节和抗炎作用可预防AD的发生发展。

实验材料与仪器

1. 实验材料

混合微生物培养物（LS）

细胞系：小鼠树突状细胞系、人表皮角质形成细胞系

实验动物：NC/Nga小鼠

试剂：10%胎牛血清、青霉素-链霉素、重组人TNFα、干扰素（IFN）γ、酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒、单克隆抗体（PE/Cyanine7偶联抗小鼠CD3、PE偶联抗小鼠CD4等、小鼠T激活剂CD3/CD28磁珠、Biostir AD（尘螨提取物）、4%十二烷基硫酸钠溶液

2. 实验仪器

CellDrop™细胞计数系统

BD FACSAria™III细胞分选仪

ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪

实验过程

1. 体外实验

• DC2.4细胞实验：将70%汇合度的DC2.4细胞（1×10⁴个细胞/100μL）接种到96孔培养板中，暴露于不同浓度的LS，通过ELISA定量检测上清液中IL-10和TNFα的浓度。

• HaCaT细胞实验：将70%汇合度的HaCaT细胞（1×10⁴个细胞）接种到含100μL培养基的96孔培养板中，用重组人TNFα和IFNγ刺激1小时后，加入100μL不同浓度的LS，孵育24小时，通过ELISA定量检测上清液中IL-8和TARC的浓度。

2. 体内实验

• AD小鼠模型建立：通过局部致敏Biostir AD（尘螨提取物）并局部应用4%十二烷基硫酸钠溶液，在NC/Nga小鼠中建立AD模型。

• 给药方案：治疗组从AD发病后第19天（平均AD评分为2.07）至第33天，每日局部涂抹0.1mL/只10% LS溶液（n=8）或蒸馏水溶媒（n=7）；预防组从第0天至第18天（AD诱导前）进行局部给药。

• 指标监测：实验期间每周监测一次TEWL、背部皮肤厚度和临床评分（0-4分，分别对应无症状、轻度、中度、重度、极重度）。

ASCH VAPOSCAN经皮水分流失测量仪

• 样本收集与分析：最后一次致敏后1天，收集小鼠耳后淋巴结（LN），制备单细胞悬液并计数；通过BD FACSAria™III细胞分选仪分析细胞表型；将淋巴结单细胞悬液（5×10⁵个细胞/孔）与小鼠T激活剂CD3/CD28磁珠孵育24小时，ELISA检测上清液中IFNγ、IL-4、IL-13和IL-17水平；对皮肤样本进行盲法半定量组织病理学评估，采用0-3分制（0为正常，1为轻度，2为中度，3为重度）。

实验结论

体外实验中，LS处理增强DC2.4细胞分泌IL-10和TNFα，且能减少受刺激HaCaT细胞产生IL-8和TARC，呈现剂量依赖性。

在AD小鼠模型的治疗设置中，LS虽未明显改变临床症状、皮肤厚度和TEWL，但改善了角质层增生和表皮结痂等组织学表现，同时减少了局部淋巴结中IgE阳性B细胞数量和IL-4水平。

预防治疗效果更为明显，LS能降低AD小鼠的临床症状和组织学病变程度，减少淋巴结中效应T细胞数量和IL-13水平。

总体而言，副干酪乳杆菌、膜毕赤酵母和酿酒酵母的混合微生物培养物（LS）具有免疫调节和抗炎活性，对AD的预防效果优于治疗效果，为AD的早期局部微生物组调节干预提供了潜在策略。

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